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發(fā)布時間:2021-02-01

 

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(Fluid Thioglycollate Medium)是 Brewer 1940 年發(fā)明,自20 世紀(jì)50 年代起,國內(nèi)外藥典陸續(xù)將其收錄,用于藥品的無菌檢查。1977 年版《中國藥典》無菌檢查項下,將硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基作為選擇性培養(yǎng)基列入,并注明用于汞砷類化合物的無菌檢查。1985 年版《中國藥典》,硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基收載于無菌檢查項下,培養(yǎng)基的名稱為“需氧、厭氣菌培養(yǎng)基”。在此后的各版《中國藥典》及《中國生物制品規(guī)程》,均收載硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基用于無菌檢查。

雖然硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基存在一定的局限性,其不能使所有的梭狀芽孢桿菌生長,但之所以能夠沿用至今,是因為其具有不可替代的巨大優(yōu)勢。即其能在普通有氧環(huán)境下提供厭氧條件,使需氧菌和厭氧菌均能夠生長良好,并易于觀察結(jié)果,這提供了一般實驗室難以達到的厭氧培養(yǎng)條件。
 

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成分分析及原理
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我們先看一下硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配方:

(1)碳源和氮源

酪胨(胰酶水解))L-胱氨酸:是由酪蛋白經(jīng)過胰酶水解后,將大分子的酪蛋白分解為?、胨、肽及多種氨基酸。由于原材料是從奶中提取的酪蛋白,質(zhì)量穩(wěn)定,氨基酸種類多,優(yōu)于一般的胨,與L-胱氨酸構(gòu)成細(xì)菌成長所需的氮源。

葡萄糖 : 提供微生物生長所需的碳源。自然界中大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖,由于細(xì)菌代謝過程中分解代謝葡萄糖產(chǎn)酸,培養(yǎng)及加熱滅菌時葡萄糖被破壞會產(chǎn)生有毒物質(zhì),因此應(yīng)注意其用量及加熱次數(shù)。

酵母浸出粉 : 酵母浸出粉是由氨基酸類、肽類、水溶性維生素及酵母多糖、酵母核酸組成的一種混合物。它不僅能補充氮源,還能提供微生物生長的各種維生素及氨基酸。

2)無機鹽類

氯化鈉及酪胨、酵母浸出粉中含有的等無機離子,構(gòu)成細(xì)菌細(xì)胞的組織物質(zhì),具有影響酶活性及調(diào)節(jié)滲透壓的作用。 

3)厭氧(還原)環(huán)境的形成與保持

硫乙醇酸鈉或硫乙醇酸: 在培養(yǎng)基中的主要作用有兩方面,一是L-胱氨酸、葡萄糖有降低氧化還原電位的作用,使深部氧化還原電位較低,因而維持培養(yǎng)基下層的厭氧條件,有利于厭氧菌的生長二是具有鈍化砷和汞類藥物及防腐劑的抑菌作用。當(dāng)汞鹽等物質(zhì)存在時,它與培養(yǎng)基中的SH 基結(jié)合,抑制了細(xì)菌的生長。當(dāng)培養(yǎng)基中有硫乙醇酸鹽時,培養(yǎng)基內(nèi)SH 基增多,消除汞鹽等抑菌現(xiàn)象,有利于細(xì)菌的生長。

瓊脂 : 在培養(yǎng)基中加入少量瓊脂,可減少液面流動,降低氧的吸收,維持培養(yǎng)基底部的還原電位,有利于厭氧菌的生長。但應(yīng)選用透明度好的瓊脂,以免影響判斷結(jié)果。

4)氧化還原指示劑

刃天青為氧化還原指示劑,新鮮制備的培養(yǎng)基,溫度較高,培養(yǎng)基管的上部與氧接觸,刃天青呈藍色,而中下部培養(yǎng)基呈無氧狀態(tài),刃天青還原為無色,當(dāng)培養(yǎng)基放置后,培養(yǎng)基與空氣接觸,有溶氧,刃天青被氧化,變?yōu)榉奂t色。

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使用應(yīng)注意事項
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配制硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基時,除按照藥典規(guī)定的方法制作外,還需要注意以下問題:

1硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基有0.075 %的瓊脂,在滅菌后,培養(yǎng)基應(yīng)呈現(xiàn)無渾濁狀態(tài),如果放置一段時間,出現(xiàn)輕微渾濁,尤其是放入冰箱后,渾濁現(xiàn)象更加明顯。渾濁程度一方面可能與培養(yǎng)基用的瓊脂質(zhì)量有關(guān),另一方面也可能與滅菌是否徹底有關(guān),具體情況應(yīng)具體分析。隨著目前無菌檢查對培養(yǎng)基的質(zhì)量要求越來越高,包括北京三藥在內(nèi)的國內(nèi)幾家培養(yǎng)基供應(yīng)商在這方面的研究有質(zhì)的突破,不僅澄明度高,氧化層也能維持穩(wěn)定。

2如果存在大體積配制,然后分裝到小的容器中的情況,應(yīng)注意分裝的均一性。

3培養(yǎng)基在滅菌后至使用過程中取放應(yīng)避免搖晃,以免培養(yǎng)基因振動而進入氧氣,影響培養(yǎng)基的使用,接種操作應(yīng)動作迅速、敏捷。

4在接種前,如果氧化層(粉紅色)的高度超過培養(yǎng)基深度的1/3,須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消失(不超過20 min),迅速冷卻,只限加熱一次,并防止被污染。

5硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基含有較多的還原性物質(zhì),在滅菌過程中,應(yīng)注意在無菌保證的前提下,避免過熱,以防止PH降低到6.9以下的可能。

6供試品加入到硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中之后,可能出現(xiàn)瓊脂析出的情況,這個應(yīng)根據(jù)調(diào)查情況具體分析,并采取有效措施。
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